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      原代細胞培養體系配置方法

      發(fā)布時(shí)間: 2023-03-07  點(diǎn)擊次數: 3611次

      原代代培養體系一般由以下四種 (三種) 組成:

       

      名稱(chēng)

      體積

      保存條件

      基礎培養基

      500ml

      4℃、避光

      添加劑

      5ml

      -20℃、避

      胎牛血清 (FBS)

      0-50ml

      -20℃、避

      雙抗 (青霉素/鏈霉素,P/S)

      5ml

      -20℃、避

       

      添加劑和雙抗通常濃度為 100X(100 倍工作濃度)。血清的添加比例有 0%(不添加),1%(5ml), 2%  (10ml),5%  (25ml),10%  (50ml) 幾種。

      一次使用時(shí)先將-20℃保存的添加劑、雙抗、FBS 轉移到 4℃溶解后,在滅菌后的百級潔凈 等級環(huán)境中操作,所使用的容器和移液耗材均需要進(jìn)行過(guò)無(wú)菌處理。

      首先將解凍的 FBS、添加劑和雙抗進(jìn)行分裝,平均分裝成 5- 10 份,留下本次配制所需要的量, 剩余的繼續放回-20℃保存,之后按需取用融化后配制培養基,避免反復凍融。

      建議用無(wú)菌的 50ml 離心管盛裝配置好的培養基。

       

      配制方法:在每個(gè) 50ml 離心管中加入①500ul 添加劑、②500ul 雙抗、③50×血清百分比 ml 的胎牛血清、④ (50× (1-血清百分比) - 1) ml 的基礎培養基。配制完成后蓋上蓋子, 顛倒混勻備用。

      例如:在血清比例為 5%的條件下,50ml 離心管中各組分的體積分別為:

      基礎培養基:(50× (1-5%) - 1) =46.5ml+添加劑:500ul +雙抗:500ul+血清:50×5%=2.5ml

       

      配置好的培養基置于 4℃避光保存。由于添加劑中有很多重組蛋白,易發(fā)生降解,故配置好的培養基有效期僅為 3-4 周,請盡快使用。因此建議每次配制 1-2 (50- 100ml),當然 使用量大的情況下也可以適量增加配置量。

       

      P.S. :不建議客戶(hù)將全部的血清、雙抗、添加劑直接加入基礎培養中混勻使用,原因如下: 1.500ml 的基礎培養基的體積較大,灌裝時(shí)體積波動(dòng)很大,直接加入,無(wú)法準確地控制因子 血清的工作濃度。

      2.     配制好的培養基僅能在 4℃保存 3-4 周,如果期間沒(méi)用完,繼續使用會(huì )影響培養效果。 如果是-20℃保存,可以延長(cháng)保存時(shí)間,但是反復凍融也會(huì )影響培養基的效果。

      3.      如果使用培養基時(shí)由于操作失誤導致污染,分裝能減少培養基的損失量。


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